水產品孔雀石綠、結晶紫的速測技術

4.5.1概述

孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，又名堿性綠、嚴基塊綠、孔雀綠。它既是殺真菌劑，又是染料，易溶于水，溶液呈藍綠色。研究結果表明，孔雀石綠具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用。鑒于孔雀石綠的危害性，我國將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》。

以往，孔雀石綠殘留量測定采用液相色譜法，操作復雜，需要專業實驗人員，儀器工作環境要求高，不能滿足現場檢測需求。與此相比，孔雀石綠定性快速檢測試劑盒法的檢測步驟較簡單，技術條件要求低，大大縮短了測定時間，同時也降低了檢測成本。

4.5.2水產品孔雀石綠、結晶紫的速測技術—速測盒法

1.速測原理

水產品中的孔雀石綠、結晶紫及其代謝產物無色孔雀石綠、無色結晶紫經過前處理后，樣液經過孔雀石綠SPE小柱富集形成有色環帶，可初步判斷樣品中是否含有有色孔雀石綠、結晶紫。用洗脫劑將柱上待檢物洗脫下來，經柱衍生化后，加萃取劑，若萃取劑有明顯的綠色或紫色說明樣品中含有待檢物質。將萃取劑取出滴于白色點滴板上，可在板上形成綠色或紫色環斑，從而可準確定性樣品中是否含有孔雀石綠或結晶紫。

2．速測范圍

本法用于檢測魚類、蝦類等孔雀石綠、結晶紫、無色孔雀石綠、無色結晶紫成分，適用于市場監督部門、水產監督部門對水產品的現場及化驗室檢測監控。

本方法使用的試材由北京中衛食品科技公司、廣州天河綠洲生化研究中心提供。

3．方法特點

(1)可現場操作，用于快速篩選法。

(2)檢測速度快，檢測一個樣品30min左右，可多殘留分析。

(3)不需其他試劑，檢測成本低。

(4)不需做對照實驗，特異性高，可準確定性，檢測下限1.0ug/kg。

4．速測步驟與結果判定(實驗室快速按照A，現場快速按照B)

(1) A取水產品可食部分用絞肉機絞碎后，準確稱取10.0g于100mL離心管中，加入提取劑1、提取劑2各一瓶，振搖5min后，4000rpm離心5min，取上清液10mL于100mL量筒中，用蒸餾水定容至30mL。

B用剪刀剪取約10g樣品于研缽中，加入一瓶提取劑2研碎后，再加入一瓶提取劑1繼續研磨約3～5min，用濾紙過濾后擠干殘渣，收集濾液10mL于100mL量筒中，用蒸餾水定容至30mL。

(2)層析柱激活。層析柱在使用前依次加入2mL洗脫劑、5mL蒸餾水，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(3)過層析柱。將50mL注射器與層析柱連接，將步驟(1)中收集到的樣液倒入注射筒里，用注射塞加壓，加快流速，建議30mL樣本通過柱子的時間為5～8min，待樣液*流干，棄去流出液，然后依次加2mL洗滌劑及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄。

(4)結果初判。觀察層析柱中吸附劑顏色變化，若吸附劑逐漸形成綠色環帶，可初步判斷樣本中含有孔雀石綠；若吸附劑逐漸形成紫色環帶，可初步判斷樣本中含有結晶紫；加0.8mL洗脫液于層析柱中，吸耳球上加壓，用離心管1收集流出液，根據液體顏色來判斷。

(5)衍生化。依次加2mL洗脫液及2mL蒸餾水于層析柱中，吸耳球上加壓，廢液舍棄，將一瓶衍生化試劑倒入層析柱中，加入2mL蒸餾水用吸耳球從上口加壓擠干；棄去流出液，將步驟(4)中離心管1的洗脫液加入柱中，吸耳球上加壓，用離心管2收集流出液，再用0.8mL洗脫液于層析柱中，吸耳球上加壓，用此離心管2收集混勻。

(6)萃取。取步驟(5)中的離心管2，加入0.5mL蒸餾水后，再加入0.5mL萃取劑，扣上管塞混勻靜置，離心管2下層若有明顯的綠色或紫色則可判斷樣品中含有孔雀石綠或結晶紫，若無明顯的綠色或紫色需進一步的判斷。

(7)檢測。用1mL注射器取步驟(6)中離心管2中的下層萃取液(注意不要吸到上層的液體)，加到白色點滴板的一個孔上，樣液漸漸揮干，若在孔上形成綠色斑環說明樣品中含有孔雀石綠，形成紫色斑環樣品中含有結晶紫。

文章來源：《食品安全快速檢測技術》

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